实验一 学习细菌培养的基本技术

　　[预习知识]

　　1.根据细菌的_________而选择多种原料配置而成的培养基，不仅含有细菌生长繁殖所需要的_________，还要有_________。本实验所用的牛肉膏蛋白胨培养基，用途广泛，适于

芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等多种_________的培养。

　　2.配置好的培养基必须经过_________才能使用。灭菌是指对不同的材料，应当采取不同的灭菌方法，培养基一般采用__________________灭菌法。就是将待灭菌的培养基放入密闭的通过加热使锅内的水沸腾并产生水蒸气。当水蒸汽将锅内的_________排尽后，关闭排气筏并继续加热，这时锅内的压力就会升高，高压条件下水的_________升高，高压蒸汽灭菌法利用的是_________使菌体蛋白(凝固变性)，从而达到灭菌的目的。

　　3.除了水之外，微生物对于营养物质需要量最大的是

　　A、碳源 B、氮源 C、生长因子 D、无机盐

　　4.牛肉膏中能为细菌提供的营养成分

　　A、只是氮源 B、有碳源和氮源等 C、只是碳源 D、没有生长因子

　　5、做为自养生物的培养基、可以不必加入

　　A、碳源 B、氮源 C、有机物 D、无机物

　　6、配置培养基要求考虑符合营养协调的原则，就是要使各种营养物质的浓度和比例

　　A、保证微生物最大繁殖速率的需要

　　B、保证微生物次级代谢产物产量最高

　　C、满足微生物初级代谢产物合成的需要

　　D、根据微生物代谢特性符合培养目的

　　7、细菌对培养基最适pH的要求一般

　　A、都是6.5—7.5 B、多为5.0—6.0 C、都是7.5—8.5 D、多为6.5—7.5

　　8、灭菌的要求，就是要杀灭各种微生物的

　　A、所有旺盛生长的细胞，包括正在繁殖的细胞

　　B、正在进行分裂增殖的细胞，不包括孢子和芽孢

　　C、所有正在生长的细胞，不包括芽孢和孢子

　　D、正在生长和增殖的细胞、暂时休眠的芽孢或孢子

　　9.巴氏消毒法常用于酒、奶等食品的消毒，就是加热到50℃—60℃、保持30min，能杀死一般杂菌和病原菌。这与灭菌的要求相比，消毒：

　　A、不能杀灭芽孢等耐高温的细胞 B、能杀灭芽孢等休眠状态细胞

　　C、只能杀灭各种细菌，包括芽孢 D、能杀灭各种真菌，包括孢子

　　[思考与练习]

　　1.在高压蒸汽灭菌开始以前，为什么要将灭菌锅内的冷空气排尽?

　　2、灭菌完毕以后，如果压力未降到零就打开排气阀，会出现什么现象?为什么?

　　3.接种操作为什么一定在火焰旁边进行?

　　4.在该实验中，利用了哪些消毒灭菌的方法?

　　5.按照培养基的物理性质和化学成分分类，你认为本实验中所用的属于哪类培养基?

　　6.在你的实验观察培养中，培养结果能否反映“细菌生长曲线”的一般规律?

　　请根据你的观察和实践结果，试说明细菌群体生长的四个主要时期的表现特征与原因。

　　7、在培养基配置的过程中，下列那些操作是不正确的?

　　A、趁热将培养基分装到洁净的试管中，培养基高度为试管的1／5

　　B、在溶化过程中最后要补加蒸馏水以达到所需容量

　　C、在用试纸调pH值时要随时用pH试纸测试

　　D、试管加塞后，每10支用绳捆扎好，在试管外挂上标签，注明培养基名称、配置日期和制作者姓名，就可以进行灭菌。

　　8.配置培养基时搁置斜面的目的是：

　　A、不搁置斜面的培养基容易被污染 B、使培养基容易凝固

　　C、扩大接种面积 D、不利于杂面生长

　　9.培养基配置完成并经过高温消毒后，为什么要趁热分装?

　　A、趁热分装可以对容器进行消毒和灭菌

　　B、培养基冷却后会凝固，不能再均匀分装

　　C、保证培养基中的营养成分不会流失

　　D、为微生物的培养提供适宜的温度条件

　　10.本实验中配置培养基加入的琼脂是为了

　　A、提供碳源 B、提供氮源

　　C、使培养基成凝胶状 D、给细菌提供生长因子

　　11.本实验使用的灭菌手段有

　　A、高压蒸气法和酒精棉擦拭法 B、煮沸法和火焰灼烧法

　　C、肥皂清洗和酒精绵擦拭 D、高压蒸汽法和火焰灼烧法

　　12.如果本实验中所用的培养基食盐浓度较高，则可能作为

　　A、金黄色葡萄球菌的选择培养基 B、各种细菌都适合的细菌培养基

　　C、放线菌适合生长的选择培养基 D、酵母菌适合生长的酵母培养基

　　13.若要较好地观察到单个细菌增殖后代的菌落，在本文验操作中最好的接种方法是：

　　A、用接种环在培养基表面轻点若干点迹

　　B、用接种环在培养基表面轻划一条S线

　　C、将接种环插入培养基浅层后轻轻移出

　　D、将接种环在培养基表面反复涂抹数次

　　14、以下是一个证明食物腐败是由微生物引起的实验，阅读这段材料和图示，回答相关的问题：

　　①把碎肉和大豆加水煮烂，用两层纱布滤取肉汤备用。

　　②在3只三角烧瓶里，各注入50ml肉汤。第一个瓶不用瓶塞，第二个瓶用药棉塞紧，第三个瓶用装有S形弯玻管的药棉瓶塞塞住。

　　③把3只三角瓶放在盛水的锅里隔水加热，使锅里的水沸腾5min。取出3只三角瓶，冷却后放在温暖的地方。

　　④每天观察肉汤的变化。结果，一天后，不加塞烧瓶里的肉汤已浑浊，液面有一层薄膜，这是细菌在液体基质上形成的菌落，瓶内有异味，说明肉汤已腐败。加药棉瓶塞的烧瓶内的肉汤几天后也开始腐败。加药棉塞和S形玻管的三角瓶里的肉汤维持较长的时间不腐败，但肉汤也终将腐败。

　　(1)不加塞的瓶内的肉汤为什么会很快地腐败?

　　(2)加药棉塞瓶内的肉汤几天后为什么也开始腐败?

　　(3)实验操作的第③步所起的作用是什么?

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