【例题17】一级结构破坏是

　　【例题18】二、三级结构破坏是

　　【例题19】四级结构破坏是

　　【例题20】四级结构形成时出现

　　二、蛋白质结构和功能的关系

　　一级结构是空间构象的基础，也是功能的基础。一级结构相似的蛋白质，其空间构象及功能也相近。若一级结构发生改变影响其功能，称为分子病。

　　蛋白质空间构象与功能有密切关系。蛋白质空间结构改变后，可导致其生理功能丧失。蛋白质变性后，只要一级结构未被破坏，仍可在一定条件下复性，恢复原有构象和功能。

　　三、蛋白质的理化性质 见与氨基酸理化性质的鉴别表。

　　【例题21】1997蛋白质变性时

　　A.空间结构破坏，一级结构无改变 B.280nm处光吸收增加

　　C.溶解度降低 D.生物学功能改变

　　【例题22】1994下列关于免疫球蛋白变性的叙述，哪项是不正确的？

　　A.原有的抗体活性降低或丧失 B.溶解度增加

　　C.易被蛋白酶水解 D.蛋白质的空间构象破坏

　　E.蛋白质的一级结构并无改变

　　四、蛋白质的分离和纯化

　　1.蛋白质沉淀和盐析 盐析是指在蛋白质溶液中加入大量的中性盐(如氯化钠、硫酸钠、硫酸胺)，使蛋白质沉淀。盐析一般无蛋白质的变性。

　　2.电泳 利用蛋白质是两性电解质的特性。分子量小，带电多的蛋白质泳动速率快。

　　3.透析 利用透析袋将大分子的蛋白质与小分子化合物分开。

　　4.层析 利用蛋白质的电荷量和性质不同，通过离子交换层，或亲和层析将蛋白质分开。如使用阴离子交换层析，由于阴离子交换树脂颗粒上带正电荷，能吸引溶液中的阴离子。然后用含阴离子的溶液洗柱。含负电荷小的蛋白质首先被洗脱下来，增加阴离子浓度，含负电荷多的蛋白质也被洗脱下来，于是两种蛋白质被分开。

　　5.分子筛 也称凝胶过滤。是利用分子大小分离蛋白质。

　　6.超速离心 利用蛋白质的密度、形态不同、沉降系数不同而分离蛋白质。

　　注意：①利用蛋白质两性性分离蛋白质的有：电泳、层析

　　②利用蛋白质分子大小分离蛋白质的有：透析、分子筛(凝胶过滤层析)

　　【例题23】2000下列蛋白质通过凝胶过滤层析时最先被洗脱的是

　　A.马肝过氧化氢酶(分子量247500) B.肌红蛋白(分子量16900)

　　C.人血清清蛋白(分子量68500) D.牛β-乳球蛋白(分子量35000)

　　E.牛胰岛素(分子量5733)

　　【例题24】1993用凝胶过滤层析(交联葡聚糖凝胶)柱分离蛋白质时，下列哪项是正确的？

　　A.分子体积最大的蛋白质最先洗脱下来

　　B.分子体积最小的蛋白质最先洗脱下来

　　C.不带电荷的蛋白质最先洗脱下来

　　D.带电荷的蛋白质最先洗脱下来

　　E.没有被吸附的蛋白质最先洗脱下来

　　解题：①分子筛(凝胶过滤层析)是以蛋白质分子大小不同进行的分离提纯。是在层析柱内充满带小孔的颗粒，蛋白质溶液加入柱的上部，让其自然下渗。这时，小分子蛋白质进入凝胶微孔，大分子不能进入先洗脱下来，小分子后洗脱下来。并不是想当然的小分子由于滤过快，先洗脱下来。

　　②离子交换层析，是以蛋白质分子所带电荷不同进行的分离提纯。若以电荷考虑，则含电荷小的蛋白质首先被洗脱下来。

　　五、蛋白质中氨基酸序列分析

　　多肽链中氨基酸序列分析包括下列步骤：

　　1.确定多肽链的N末端和C末端残基。最常用方法为二硝基氟苯和丹磺酰氯法。

　　2.酶或化学试剂水解多肽链。羧肽酶Y最常用。

　　3.降解法分析小肽段序列。用靡蛋白酶水解芳香族氨基酸，溴化腈能在蛋氨酸残基羧基侧将肽链切断，胰蛋白酶可水解半胱氨酸和精氨酸残基。

　　4.用肽段重叠法测定完整多肽链的序列。

　　【例题25】2001常用于测定多肽N末端氨基酸的试剂是

　　A.溴化氢 B.丹磺酰氯 C.β-巯基乙醇 D.羟胺 E.过甲酸

　　常考点 几种特殊的氨基酸；蛋白质的分子结构；蛋白质的理化性质及提纯。

　　本章参考答案

　　1.A2.D3.B4.D5.C6.A7.D8.D

　　9.D10.C11.E12.AD13.D14.D15.ABCD16.E

　　17.D18.C19.B20.A21.ACD22.B23.A24.A

　　25.B